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馬の胚移植

馬の胚移植


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胚移植は、胚をドナーの雌馬の子宮からレシピエントの雌馬の子宮に移し、妊娠を満期まで運ぶ補助生殖技術です。胚は通常、排卵後約6〜8日に子宮洗浄(洗浄)によってドナー牝馬から回収されます。その後、胚を同期化されたレシピエント雌馬の子宮に入れます。

長所

  • 貴重な牝馬は、季節ごとに複数の子馬を生産できます。
  • 牝馬は子馬を生産している間、競争することができます。
  • 遺伝的に価値のある若い牝馬は、肉体が成熟する前、または訓練中に子馬の生産を開始できます。
  • 子宮生検に基づく病理学のために、自分で子馬を運ぶことができない高齢の雌馬は、子馬を生産し続けることができます。
  • 妊娠を妨げたり、腹筋の引き裂きや古い骨盤骨折などの出産を防ぐ身体障害のある牝馬は、まだ子孫を生む可能性があります。

    短所

  • 手順は高価です。
  • 一部の品種協会では制限または禁止が実施されています。
  • 雌馬で胚移植を行うには専門的な訓練が必要であるため、すべての馬の施設または開業医がこのサービスを提供する準備ができているわけではありません

    この手順の成功は、次の要因のいずれかを制御する能力に依存します。

  • ドナーの雌馬の固有の生殖能力。これは制御できません。さらに、多くの場合、不妊が一部の牝馬が胚移植候補となる理由です。
  • レシピエントの雌馬固有の受精能。これらの牝馬は、若い年齢と正常な生殖管に基づいて選択する必要があります。
  • 胚移植を行う際には、繁殖管理またはタイミングが適切でなければなりません。
  • 胚の回収および移植技術。獣医の経験は、手順の成功に重要な役割を果たしています。
  • ドナーと受信者の同期の度合い。ドナーとレシピエントの雌馬は、ホルモンの使用と同期しています。胚を適切な子宮環境に確実に移すには、緊密な同期が重要です。

    胚移植のための機器

    胚移植プログラムを開始するには、専門の研究所を設置する必要があります。胚移植装置は、馬の飼育用品を販売するほとんどの企業から市販されています。超音波検査機など、通常の補助育種に使用される通常の機器とは別に、次のものが必要です。

  • ドナーの子宮を洗い流すフォーリーカテーテル。これは、胚回復のためにドナー牝馬の子宮を洗い流すために使用される特別なタイプのカテーテルです。先端のバルーンにより、雌馬の子宮頸部にカテーテルが留まり、フラッシング手順中の液体の損失を防ぎます。
  • フォーリーカテーテルの端に取り付けられ、雌馬の子宮から液体を導入および排出するための追加のチューブおよびコネクタ。
  • 洗浄液から胚を回収するための特別なフィルター。
  • 胚を検索するための解剖顕微鏡。
  • 無菌培養皿、毛細管ガラスピペット、その他の実験器具。

    胚移植に最も一般的に使用されるフラッシング培地は、10%のウシ胎児血清と抗生物質を補充したダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水(DPBS)です。この培地は、胚を洗浄し、レシピエントの子宮に移すためにも使用されます。培地は液体または粉末の形で購入し、実験室で再構成することができます。高価なDPBSの代替として、一部の開業医は乳酸リンゲル液を代わりに使用します。

    胚の回復を試みる前に、すべての器具と培地をインキュベーターで体温まで温めて、胚への低温ショックを避ける必要があります。すべての機器は、使い捨てにするか、適切に洗浄して使用前に滅菌する必要があります。胚移植装置の洗浄には洗剤や消毒剤を使用しないでください。胚の生存率を損なう可能性のある残留物が残る可能性があるためです。機器は温かい水道水のみで洗浄し、蒸留水で十分にすすぎます。再利用可能なカテーテル、チューブ、フィルターは使用前にガス滅菌する必要があります。

    別のフォーリーカテーテルは、胚回復手順のために確保し、感染症の雌馬の子宮を洗浄するために使用するカテーテルと混合しないでください。

    胚移植の受取人の選択

    ドナーの雌馬の繁殖と胚の回収にリソースと専門知識を投資し、それから子馬を運べない雌馬の子宮に配置するのは無駄であるため、最適なレシピエントを選択するために時間とお金を投資することは非常に価値があります期間。したがって、胚移植プログラムの受給者となる目的で購入されたすべての牝馬は、完全な繁殖健全性試験を受ける必要があります。受信者プログラムに参加するすべての牝馬は、BSEのすべての側面を通過し、生検サンプルで評価されたとき、子宮内膜(子宮の内層)が健全でなければなりません。

    受信者の年齢も重要です。成熟しているが比較的若い牝馬(5〜8歳)が子馬を満期まで運ぶことができる可能性が高くなります。多くの場合、受取人として購入した牝馬は公売を通じて取得され、年齢は不明です。歯の評価による年齢の評価に自信を持つ必要があります。

    理想的には、レシピエントプログラムの牝馬は、ドナーの牝馬の品種サイズと同等またはわずかに大きい体のサイズに従って選択する必要があります。ドナーによる遺伝的入力に関係なく、雌馬のサイズが子馬のサイズに影響することが知られています。

    最後に、プロセスを通じてずっと扱いやすくなるだけでなく、より良い母親を作る可能性があるため、良好な素因を持つ牝馬を選択することは十分に価値があります。この点で、牝馬の背景を知り、過去に無事に子馬を産んだ雌馬を選ぶことが理想的です。牝馬が子馬を満期まで運ぶ能力があることだけでなく、雌馬の母親であることを確実に知っているでしょう。残念なことに、クライアントから提供されない限り、受信者の雌馬の過去はしばしば不明です。

    ドナーと受信者の同期プロトコル

    個人の好みや経験に応じて、ドナーと受信者の多くの同期プロトコルが使用されます。ホルモンは、ドナーとレシピエントに与えられ、それらすべてが同時に発情するという目的で発情周期を操作します。これらの治療法は、雌馬にプロスタグランジンの単一ショットを与えることから、牝馬をプロゲステロンとエストロゲンのショットの完全な治療スケジュールに入れることまでさまざまです。

    面倒ですが、一連のプロゲステロン/エストロゲンショットは、ドナーとレシピエントの間で最高の同期を提供します。簡単に言えば、プロトコルは、プロゲステロンとエストロゲンの組み合わせを8〜10日間毎日注射することです(150 mgのプロゲステロンと10 mgのエストラジオール-17bを1ショットあたり)。これにより、雌馬自身のホルモンが抑制され、治療が中止されると、ほとんどの雌馬は3〜5日で発情します。一部の牝馬は治療中に排卵する可能性があるため、プロスタグランジンショットは通常、より良い同期のためにプロゲステロンエストロゲンシリーズの最後に与えられます。

    雌馬の発情を防ぐために市販されている経口プロゲスターゲンは、同期プロトコルではうまく機能しません。

    ドナーとレシピエントが発情し、ドナーの雌馬が適切な種馬に交配されると、すべての雌馬にヒト絨毛性ゴナドトロピンのショットを与えることで排卵が誘発される場合があります。これにより、ドナーとレシピエントの排卵同期がより確実になります。受血者は、同日またはドナーの翌日に排卵した場合に理想的です。あまり理想的ではないレシピエントは、ドナーの排卵日の1日前またはそれより遠い排卵です。

    残念ながら、最良の同期プロトコルでさえ失敗する可能性があり、ドナーとレシピエントが期待通りに常に同期した熱と排卵をするわけではありません。これは、ドナーの牝馬ごとに常に複数の受取人を用意する正当な理由です。ドナーごとに少なくとも2人の受信者が推奨され、3人が理想的です。

    ドナーマーレの繁殖管理

    胚移植プログラムの成功の最初の制限要因は、ドナーの雌馬が妊娠する必要があることです。したがって、ドナー牝馬の良好な繁殖管理を実践することが不可欠です。

    ドナーの雌馬は、新鮮な精液または輸送冷却精液で飼育されます。精液の質が良好であり、種牡馬の妊娠率が良好であることは重要です。明らかに、牝馬にとって理想的な種牡馬は、その生殖能力に関して常に選択されるとは限りません。ただし、胚移植プログラムの成功を妨げる可能性のある別の要因の導入を防ぐために、古い繁殖力のない種牡馬は避ける必要があります。これと同じ理由で、凍結融解した精液の使用は避けるべきです。

    最適な繁殖管理は、可能な限り排卵に近い発情期の牝馬の繁殖です。理想的には、ドナーとレシピエントの生殖管を触診と直腸ごとの超音波検査で毎日検査し、ドナーの繁殖に最適な時期を確認し、レシピエントとの同期を評価する必要があります。

    交配中に、ドナーに排卵を誘発するためにヒト絨毛性ゴナドトロピンの注射を行わなければならず、レシピエントは排卵同期をより緊密にするために同様の方法で(繁殖はしない)治療されます。

    排卵は常に超音波検査で確認する必要があります。排卵日は「0日目」とみなされ、通常、ドナーの雌馬の子宮は排卵後7日目に洗い流されます。

    胚収集手順

    ドナー牝馬からの胚の回復は通常、排卵後7日に行われます。最初に、触診と直腸ごとの超音波検査によって牝馬をチェックし、子宮の色調と外観を確認します。妊娠している牝馬は、非常に色調が均一で子宮が閉じており、子宮頸部が閉じている可能性が高く、超音波で視覚化された子宮内には体液がありません。この時点で、胚は超音波で見るには小さすぎます。

    牝馬は、会陰部(外陰部、肛門、but部)をポビドンヨード(ベタジン)スクラブで3回洗浄し、各スクラブ後に水で徹底的にすすぐことにより、胚の回復に備えます。十分にすすいだ後、その部分を清潔なペーパータオルで乾かします。

    胚移植の回復を行う人は、清潔な触診スリーブと滅菌手袋を着用し、潤滑には滅菌水ベースのゼリーを使用する必要があります。片方の手を雌馬の膣に挿入して、フォーリーカテーテルを子宮頸部から子宮体に通します。次に、カテーテルのバルーンを小さな注射器を使用して空気で膨らませるので、子宮洗浄中に体液が失われないように子宮頸部内にしっかりと留まります。

    胚の採取手順を実行するには、少なくとも2人が必要です。1人は雌馬の管内にカテーテルを保持し、1人は流体の挿入と回収を支援します。液体1リットルが重力によって雌馬の子宮に流れ込み、大きなガラスシリンダーに回収されるか、フィルターを通過して胚を捕捉します。これを3回繰り返します。

    胚の乾燥を防ぐために、回復フィルター内にいくらかの液体を保持する必要があります。回収手順が終了すると、フィルター内の液体はペトリ皿にデカントされます。胚の検索は、解剖顕微鏡を用いて拡大して実行されます。

    胚移植手順

    排卵後7日に回復が行われる場合、胚は胚盤胞の段階にあり、経験豊富なオペレーターが解剖顕微鏡で簡単に視覚化できる必要があります。

    見つかったら、胚を10%のウシ胎児血清を含む滅菌DPBSで洗浄します。胚は、ゴム球または小さなツベルクリン注射器に接続された0.25mlのフレンチ精液ストローまたはガラスピペットで処理できます。

    胚は一般に経子宮頸的に、つまり人工授精を行うかのように雌馬の子宮頸部を介して移植されます。この目的のために:

  • 選択した受信者は、尻尾を包んで縛り付けることで転送の準備をします。子宮の調子と体液の証拠を確認する必要があります。胚を子宮内に液体のある牝馬に移してはいけません。
  • その後、レシピエント雌馬の会陰部を、ドナーについて説明したように徹底的にスクラブします。
  • 胚は、5ml Air-Titeシリンジに接続された授精ピペットにロードできます。最初に約1 mlの空気を注射器に入れ、次にピペットに空気のポケットで区切られた3つの小さな培地のポケットを入れます。中央の液体ポケットには胚が入っています。
  • 転送手順を実行する人は、清潔な肩の長さのプラスチックスリーブに外科用滅菌手袋を着用する必要があります。ピペットを膣に挿入し、子宮頸部を注意深く通過させます。子宮体に進入すると、注射器のプランジャーが前方に押し出され、胚が子宮に注入されます。
  • 受精雌馬は、移乗後約7日で妊娠をチェックする必要があります。

    別の可能性は、外科的胚移植を実行することです。これは、子宮角の体外露出を可能にする脇腹切開を通して、鎮静状態の受容者が立位で行われます。胚を外科的に移植することには明らかな利点はなく、レシピエントの牝馬にとって手順はよりトラウマです。

    場合によっては、胚移植を行う所有者または開業医は、特定のドナー牝馬の胚レシピエントを持たないことを選択します。これにより、受信者の購入、確認、保守の手間や、同期に伴う費用と作業が回避されます。この場合、回収された胚は、いつでも転送可能な多数の受信者を保持している紹介施設に出荷できます。この代替の欠点は、胚の出荷に伴うリスクであり、また、胚が収集後すぐに移されない場合、妊娠率がわずかに低下する可能性があることです。

    出荷のために、胚は、90%の窒素、5%の酸素、5%の二酸化炭素の混合物で拡散することにより緩衝化された、市販の培地Hams F-10を含む滅菌バイアルにパッケージされます。準備された培地は、胚回復手順を実行する直前に転送施設に注文することができます。この培地には、ウシ胎児血清と抗生物質も補充されています。

    回収して洗浄したら、平衡化した温培地を含む3 mlの滅菌プラスチックバイアルに胚を入れ、予防策として、これを遠心管を含む50 mlの培地に入れます。

    50 mlチューブは、冷蔵輸送用にEquitainerにパッケージされています。

    包装された胚は、航空会社または夜通しの宅配便で出荷し、転送施設に到着したらすぐに、最適には回収後24時間前に転送する必要があります。